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吲哚乙酸（IAA）在吲哚乙酸氧化酶的作用下，被氧化破坏失去活性。植物体内吲哚乙酸氧化酶活力的大小，对调节体内吲哚乙酸的水平，起着重要的作用，而影响植物的生长。

在无机酸存在情况下，吲哚乙酸能与FeCl₃作用，生成红色螯合物，该物质在530nm处有最大吸收峰，酶活力的大小可以其破坏吲哚乙酸的速度表示之。吲哚乙酸的含量可用比色法测定。

• 组织样品：按照组织质量(g)∶试剂一体积(mL)＝1∶5～10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
  
• 细菌、真菌样品：按照细胞数量(10⁴个)∶试剂一体积(mL)＝500～1000∶1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
  
• 血清等液体样品：直接测定。

• 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到530nm，蒸馏水调零。
  
• 试剂二、试剂三、试剂四置于25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）水浴中保温20min。
  
• 取1.5mLEP管若干，操作表如下：
  

  成分	标准管	测定管
  试剂二	40	40
  试剂三	40	40
  试剂四	80	80
  样本上清液	－	40
  试剂一	240	200
  试剂六	800	800

  • 标准管只需做一次。
• 充分混匀后置于30°恒温水浴中，保温反应30min。
  
• 向各反应管中加入800μL试剂六。
  
• 充分混匀，置于30℃黑暗水浴保温显色30min。
  
• 取1mL显色后呈红色的反应液于1mL比色皿中，用分光光度计测定530nm处OD值，标准管记为A1，测定管记为A2。

• 按蛋白浓度计算：
  酶活定义：从开始时加入的IAA量减去酶作用后残留的IAA含量，即得被酶所催化的IAA含量。以每mg酶蛋白在1h内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。
  U(μmol/h/mg prot)＝[(A₁-0.025)÷1.334-(A₂-0.025)÷1.334]×V_样÷(V_样×Cpr)÷T＝1.5×(A₁－A₂)÷Cpr
  
• 按样本鲜重计算：
  酶活定义：以每g样本在1h内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。
  U(μmol/h/g鲜重)＝[(A₁-0.025)÷1.334-(A₂-0.025)÷1.334]×V_样÷(V_样÷V_样总×W)÷T＝1.5×(A₁－A₂)÷W
  
• 按细胞数量计算：
  酶活定义：以每1万个细胞在1h内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。
  U(μmol/h/10⁴ cell)＝[(A₁-0.025)÷1.334-(A₂-0.025)÷1.334]×V_样÷(V_样÷V_样总×W)÷T＝1.5×(A₁－A₂)÷细胞数量
  
• 按液体体积计算：
  酶活定义：以每mL酶液在1h内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。
  U(μmol/h/mL)＝[(A₁-0.025)÷1.334-(A₂-0.025)÷1.334]×V_样÷(V_样÷V_样总)÷T＝1.5×(A₁－A₂)